La sicurezza di L-5-MTHF-Ca è stata valutata mediante test di genotossicità e tossicità per lo sviluppo subcronico e prenatale. Nei test in vitro L-5-MTHF-Ca non è risultato mutageno e non ha indotto altri eventi cromosomici. 

L-5-MTHF-Canon è né teratogeno né embriotossico. Sulla base dei risultati degli studi in vitro e in vivo, è supportato l’uso sicuro di L-5-MTHF-Ca come ingrediente negli alimenti. Il livello in cui non sono stati osservati effetti avversi è stata la dose più alta nello studio sulla tossicità subcronica, vale a dire 400 mg/kg di peso corporeo/giorno per ratti maschi e femmine.

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